Javascript è attualmente disabilitato nel tuo browser.Diverse funzionalità di questo sito non funzioneranno mentre javascript è disabilitato.accesso aperto alla ricerca scientifica e medicaDalla presentazione alla prima decisione editoriale.Dall'accettazione editoriale alla pubblicazione.La suddetta percentuale di manoscritti è stata respinta negli ultimi 12 mesi.Riviste scientifiche e mediche peer-reviewed ad accesso libero.Dove Medical Press è membro dell'OAI.Ristampe in blocco per l'industria farmaceutica.Offriamo vantaggi reali ai nostri autori, inclusa l'elaborazione accelerata degli articoli.Registra i tuoi dettagli specifici e farmaci specifici di interesse e abbineremo le informazioni fornite agli articoli dal nostro ampio database e ti invieremo prontamente copie PDF via email.Torna a Diari » Rivista Internazionale di Nanomedicina » Volume 17Autori Liang M, Guo M, Saw PE, Yao YPubblicato il 6 maggio 2022 Volume 2022:17 Pagine 2069—2078DOI https://doi.org/10.2147/IJN.S362418Revisione tramite revisione tra pari anonima singolaEditore che ha approvato la pubblicazione: Dr Yan ShenMeiyi Liang,1,2,* Mingyan Guo,1,3,* Phei Er Saw,1,4 Yandan Yao1,2,5 1Laboratorio chiave della provincia del Guangdong di epigenetica dei tumori maligni e regolazione genica, Laboratorio congiunto Guangdong-Hong Kong per la medicina dell'RNA , Sun Yat-sen Memorial Hospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou, 510120, Repubblica popolare cinese;2Centro per il tumore al seno, Sun Yat-sen Memorial Hospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou, 510120, Repubblica popolare cinese;3Dipartimento di Anestesiologia, Sun Yat-sen Memorial Hospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou, 510120, Repubblica popolare cinese;4Medical Research Center, Sun Yat-sen Memorial Hospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou, 510120, Repubblica popolare cinese;5Shenshan Medical Center, Sun Yat-sen Memorial Hospital, Sun Yat-sen University, Shanwei, 516621, Repubblica popolare cinese *Questi autori hanno contribuito in egual modo a questo lavoro Corrispondenza: Yandan Yao;Phi Er Saw, e-mail [e-mail protetta];[email protected] Introduzione: È noto che i chemioterapici hanno effetti collaterali indesiderati (ad es. nausea, perdita di peso, perdita di capelli, sistema immunitario indebolito, ecc.) a causa della non specificità dei farmaci.L'incapsulamento di questi chemioterapici all'interno di nanoparticelle migliora significativamente la biodisponibilità e l'emivita dei farmaci, aumentando al contempo la penetrazione e la localizzazione del tumore.Tuttavia, la maggior parte, se non tutte, le nanoparticelle nelle cliniche o nella ricerca sono sintetiche, senza studi a lungo termine sull'effetto di queste nanoparticelle in vivo.Qui, abbiamo sviluppato un sistema sinergico di nanoparticelle di resveratrolo utilizzando l'incapsulamento della lecitina.La lecitina, essendo un fosfolipide completamente naturale derivato dalla soia, possiede un'attività antitumorale intrinseca.Metodi: Lec(RSV) è stato preparato con successo utilizzando il metodo di nanoprecipitazione e caratterizzato da dimensione delle particelle e analisi del potenziale zeta e microscopia elettronica a trasmissione (TEM).L'assorbimento cellulare in vitro e gli effetti citotossici di Lec(RSV) sono stati studiati nella linea cellulare di cancro al seno umano BT474.Infine, l'assorbimento tumorale in vivo di Lec(RSV) è stato effettuato nel modello ortotopico BT474.Risultati: Lec(RSV) ha mostrato una distribuzione uniforme di ~ 120 nm, con stabilità prolungata.Lec(RSV) ha mostrato un elevato assorbimento cellulare e proprietà antitumorali in vitro.L'assorbimento dipendente dal tempo nel modello di xenotrapianto BT474 ha indicato un aumento dell'assorbimento tumorale e del tasso di apoptosi a 4 ore dopo l'iniezione di Lec(RSV) nella vena della coda.Conclusione: nel loro insieme, abbiamo sviluppato con successo un Lec(RSV) completamente naturale che possiede una potente attività antitumorale in vitro, con un buon assorbimento tumorale in vivo.Ipotizziamo che Lec(RSV) possa essere una sicura terapeutica antitumorale che potrebbe essere facilmente tradotta in applicazione clinica.Parole chiave: nanoparticelle completamente naturali, lecitina, resveratrolo, proprietà antitumoraliLa chemioterapia convenzionale è una componente cruciale dei trattamenti contro il cancro per vari tipi di cancro, in cui la strategia di trattamento include l'uso di farmaci tossici per uccidere le cellule tumorali.1,2 Sebbene la chemioterapia porti grandi progressi nel trattamento del cancro, provoca molti effetti collaterali indesiderati, come nausea, perdita di peso, perdita di capelli e sistema immunitario indebolito.Pertanto, c'è una costante ricerca di ingredienti naturali che dimostrano proprietà biologiche a supporto della chemioterapia, oltre ad avere effetti tossici inferiori.3,4 Il resveratrolo (RSV), un composto bioattivo naturale di polifenoli non flavonoidi che si trova in varie piante,5 ha dimostrato chemioterapia contro il cancro proprietà preventive nel 1997.6,7 Tuttavia, anche se l'RSV ha dimostrato di essere un promettente candidato antitumorale in diversi studi sul cancro in vitro, è stato limitato all'uso clinico a causa della sua rapida eliminazione dall'organismo e perché mancava di livelli terapeuticamente rilevanti nel flusso sanguigno.8 Pertanto, è necessario stabilire un vettore adeguato per fornire RSV in modo che possa avere effetto in loco.I veicoli per la somministrazione di farmaci a base di lipidi, inclusi liposomi e micelle, sono stati studiati intensamente e ampiamente utilizzati per molteplici applicazioni biomediche, come la terapia del cancro.9-11 In quanto trasportatori di farmaci, le nanoparticelle hanno alcune superiorità uniche che proteggono il farmaco dalla degradazione nella circolazione e ridurre gli effetti tossici sistemici.Inoltre, a causa del loro piccolo diametro, le nanoparticelle possono penetrare attraverso le fessure dei vasi intratumorali nel tumore e rimanere nel tumore a causa dell'ostruzione del drenaggio linfatico tumorale, un fenomeno noto come effetto di permeabilità e ritenzione potenziata (EPR). 12,13 Pertanto, la strategia ideale per l'RSV da applicare come efficace agente antitumorale clinico è stabilire nanocarrier adeguati per la consegna.Al-jubori et al hanno creato con successo nanoparticelle strato per strato di tamoxifene e RSV per un sistema di somministrazione di due farmaci e un potenziale trattamento del cancro al seno triplo negativo.14Attualmente, i sistemi di rilascio di nanoparticelle di solito includono l'uso di poli(etilene)-glicole (PEG).È un polimero sintetico in grado di incapsulare la maggior parte delle piccole molecole in particelle sferiche di dimensioni nanometriche.Tuttavia, studi precedenti hanno indicato che mentre la preoccupazione principale erano i contaminanti cancerogeni, i composti PEG stessi hanno dimostrato alcuni risultati di genotossicità15,16 oltre a provocare irritazione e tossicità sistemica in casi gravi.17 Contrariamente al PEG, il Lec è naturalmente presente nei tessuti vegetali e animali, con una combinazione di glicerofosfolipidi, che include fosfatidiletanolamina, fosfatidilcolina, acido fosfatidico e fosfatidilinositolo.Grazie al suo contenuto di fosfatidilcolina, la lecitina è un serbatoio di colina, che è anche un nutriente essenziale.18Qui, abbiamo combinato due sostanze naturali, Lec e RSV, e abbiamo progettato una nanopiattaforma basata sulla struttura lipidica della lecitina per incapsulare il resveratrolo.Lec (RSV) ha una distribuzione dimensionale uniforme di ~ 120 nm, con un'efficienza di incapsulamento del resveratrolo dell'85,2%.Questa nanoparticella è stabile a temperatura ambiente ea 4°C fino a dodici mesi.La cinetica di rilascio della nanoparticella di Lec(RSV) ha rivelato un lento rilascio di resveratrolo dalla nanoparticella di Lec, con intrinseche proprietà antiossidanti e antitumorali;indicando la fattibilità dell'utilizzo di questo sistema Lec(RSV) come terapia antitumorale alternativa, economica e con bassi effetti collaterali.Il resveratrolo (RSV, 99%) è stato acquisito da Aladdin (Shanghai, Cina).La lecitina e la cumarina-6 sono state acquisite da Sigma Aldrich e Alamar Blue è stata acquistata da ThermoFisher Scientific.I solventi organici (DMSO, DMF, 75% di etanolo) sono stati acquistati da Sigma Aldrich.L'acqua è stata preparata con un sistema Millipore (Bedford, MA, USA) Milli-Q® e tutte le altre sostanze chimiche erano di grado analitico.Lec(RSV) è stato preparato utilizzando il metodo di nanoprecipitazione come descritto nella nostra precedente pubblicazione.19 In breve, RSV (100 mg/mL) e Lec (100 mg/mL) sono stati sciolti separatamente in DMSO.Per creare una soluzione di lavoro di Lec(RSV), 10 µ l di Lec sono stati aggiunti a 1 µ l di RSV.Alla miscela sono stati aggiunti 89 µL di DMSO per ottenere 100 µL della soluzione.Su una fiala di vetro separata, sono stati aggiunti 10 mL di acqua di grado Millipore e agitati continuamente a 12.000 rpm a temperatura ambiente.La soluzione della miscela è stata aggiunta lentamente nella fiala tramite pipettaggio.Le soluzioni sono state quindi trasferite ad Amicon Filter (Life Science Research) e centrifugate a 2800 rpm per 10 min.Dopo ogni ciclo di centrifugazione, le soluzioni rimanenti sono state lavate con 5 ml di acqua e centrifugate nuovamente a 4000 rpm per 10 min.Questo è stato ripetuto due volte per eliminare tutto il DMSO rimanente.Il Lec(RSV) finale è stato diluito a una concentrazione finale di 1 mL in PBS e conservato a 4°C fino al successivo utilizzo.Per determinare la dimensione e il potenziale zeta di Lec e Lec(RSV), ciascuna formulazione è stata trasferita in cuvette trasparenti per l'analisi Dynamic Light Scattering (DLS).Il loro diametro idrodinamico e i potenziali zeta sono stati misurati utilizzando Zetasizer nano ZS90 (Malvern Instruments, Regno Unito).20 I dati per ciascun campione sono stati ottenuti da tre replicati, con cinque prove in ciascun replicato.Cinque aliquote di µl di Lec(RSV) (10 mg/mL) sono state applicate su griglie di rame a maglie di solo carbonio di grado TEM.Le particelle sono state lasciate sulla griglia a temperatura ambiente per 5 minuti.Ciascuna griglia è stata lavata cinque volte con acqua distillata.I campioni sono stati successivamente sottoposti a colorazione negativa utilizzando acetato di uranile al 2% e sono stati lasciati a temperatura ambiente per 2 min.Le griglie sono state quindi lavate tre volte con acqua distillata e asciugate all'aria.I campioni sono stati visualizzati utilizzando un microscopio elettronico TECNAI F20 (Philips Electronic Instruments Corp., Mahwah, NJ).Sebbene l'assorbanza UV dell'RSV sia 303 nm, la lecitina ha un'ampia assorbanza UV di 200-500 nm e un picco a 355 nm.Ciò potrebbe causare interferenze nella lettura.Pertanto, abbiamo sostituito una molecola di fluorescenza Coumarin-6 (Cou; ex: 420 nm) poiché ha un peso molecolare simile all'RSV.La sintesi di Lec(Cou) è la stessa indicata in Sintesi di Lec(RSV).Dopo la purificazione, i campioni sono stati reidratati ad un volume di 1 mL in PBS.Quindi, sono stati prelevati 10 µL di campioni di Lec(Cou) e aggiunti a 90 µL di DMSO.Il controllo positivo sarebbe 10 µl dallo stock originale della soluzione di lavoro.L'intensità di fluorescenza della cumarina è stata rilevata tramite un fluorospettrometro.Per determinare l'efficienza di incapsulamento (EE) della cumarina-6, abbiamo calcolato la quantità di cumarina-6 nel Lec(Cou) rispetto alla quantità originale di cumarina-6 utilizzata inizialmente, con la seguente formula:Per determinare la stabilità di Lec e Lec(RSV), abbiamo sintetizzato Lec e Lec(RSV) come sopra menzionato a 10 mg/mL.Le particelle Lec e Lec(RSV) sono state quindi conservate in PBS con FBS al 10% per simulare la condizione fisiologica.Le fiale sono state quindi conservate in una camera a 37°C sotto costante agitazione.In punti temporali predeterminati (1, 2, 4, 8, 12, 24 e 48 ore), la dimensione delle particelle Lec e Lec(RSV) è stata valutata mediante DLS e registrata.Per determinare il profilo di rilascio dell'RSV incapsulato, abbiamo utilizzato un metodo invertito per rilevare l'RSV rilasciato nel compartimento PBS esterno.2 mg/mL di RSV e Lec (RSV) sono stati rispettivamente aggiunti a 1 mL di PBS (contenente il 10% di FBS, pH 7,4) rispettivamente e quindi spostati in un dispositivo di dialisi Float-a-Lyzer G2 (MWCO 100 kD, Spectrum Lab) che è stato immerso in 1 mL di PBS (pH 7,4) a 37°C.Ad intervalli predeterminati (1, 2, 4, 8, 12, 24, 48, 72, 96 ore), la soluzione esterna di PBS è stata raccolta in una provetta Eppendorf.Ad ogni momento, 1 mL di PBS fresco (pH 7,4) è stato sostituito con la soluzione esterna.Questo metodo è stato ripetuto fino a quando non sono state raccolte le soluzioni PBS per tutti i punti temporali.La quantità di RSV in ciascuna provetta Eppendorf è stata quindi determinata mediante assorbimento UV a 303 nm mediante un lettore di micropiastre multimodale Synergy HT.Le cellule di cancro al seno umano BT474 sono state acquisite da ATCC e sono state coltivate e utilizzate secondo i protocolli forniti dal fornitore.Le cellule sono state mantenute a 37°C in una camera di coltura cellulare umidificata con il 5% di CO2.Le cellule sono state sospese in terreno RPMI-1640/F-12K integrato con il 10% di siero bovino fetale (FBS), 100 U/mL di penicillina e 100 µg/mL di streptomicina.Per illustrare l'assorbimento e l'internalizzazione in vitro di Lec, durante l'incapsulamento è stata aggiunta la cumarina-6 (1µM) a Lec(RSV).Le cellule BT474 sono state coltivate fino a una confluenza dell'80% circa su vetrini coprioggetto (12 × 12 mm; Fisher Scientific, Texas, USA).Prima dell'aggiunta di 200 µg/mL di Lec(RSV+Cou), il mezzo è stato sostituito con un mezzo privo di siero.Dopo 1 ora di incubazione a 37°C, le cellule sono state lavate tre volte con PBS e fissate con paraformaldeide (PFA) al 4% (p/v).I vetrini coprioggetto con cellule fisse sono stati montati su vetrini con supporti di montaggio Dako® ed esaminati utilizzando un microscopio confocale Olympus Fluoview 1000 (Olympus Imaging Co., Tokyo, Giappone).Per determinare la tossicità cellulare, le linee cellulari BT474 sono state coltivate a 5000 cellule/pozzetto a concentrazioni crescenti in una piastra da 96 pozzetti.) Lec, RSV e Lec(RSV) sono state rispettivamente aggiunte a concentrazioni specifiche (10 ~ 40 µM) e incubate in un incubatore di cellule CO2 al 5%.Dopo 24 ore, è stato aggiunto un saggio Alamar Blue da 10 µL e le cellule sono state incubate al buio per 2 ore.La fluorescenza è stata rilevata con un lettore multimodale (Biotech), Ex/Em = 500/525 nm.Il ROS Assay Kit è stato utilizzato per valutare la capacità di scavenging ROS di Lec(RSV) su BT474.In breve, le cellule (1×105/pozzetto) sono state incubate in piastre da 6 pozzetti per 24 ore in un incubatore di CO2 al 5%.Successivamente, il mezzo è stato sostituito con un mezzo fresco contenente RSV e diverse concentrazioni di Lec(RSV) per 24 ore.Quindi, a ciascun campione sono stati aggiunti 100 μL di 10 μmol/L DCFH-DA in PBS.Le cellule sono state incubate in un'incubatrice al 5% di CO2 per 30 minuti e trasferite su micropiastre nere a 96 pozzetti.La fluorescenza è stata rilevata con un lettore multimodale (Biotech), Ex/Em = 500/525 nm.Tutti gli studi in vivo sono stati condotti in conformità con le linee guida per la cura degli animali del National Institutes of Health e in condizioni rigorosamente prive di agenti patogeni nella struttura per animali della Sun Yat-sen University.Il protocollo sugli animali è stato autorizzato dai comitati istituzionali per la cura e l'uso degli animali (Università Sun Yat-sen; SYSU-IACUC-2020-B0167).1,2 × 107/0,2 ml di cellule BT-474 sono state somministrate nel tessuto mammario di topi nudi atimici Balb/C per creare il modello di cancro al seno.Quando i volumi del tumore sono cresciuti fino a 120 ~ 200 mm3, i topi sono stati utilizzati per valutare la capacità di targeting del Lec(RSV).Per l'analisi in vivo, abbiamo aggiunto FITC come molecola di fluorescenza per l'imaging.In breve, i topi sono stati separati in due gruppi (n = 3), un gruppo con Lec(RSV+FITC) circolante nel corpo per 1 ora e l'altro gruppo per 4 ore.Quindi, abbiamo prodotto Lec(RSV+FITC) sospeso in PBS, che è stato somministrato ai topi tramite iniezione nella vena della coda (0,2 mL, equivalente a RSV 2 mg/kg).Dopo 1 o 4 ore, i tessuti tumorali dei topi sacrificati sono stati raccolti e osservati con microscopia a fluorescenza.La normale distribuzione dei dati dai risultati parametrici è stata confermata dall'analisi della varianza sui ranghi di Kruskal Wallis seguita dal test di Tukey o dal test di Dunn quando i dati non erano distribuiti normalmente o dal test t di Student a seconda dei casi.Dopo la conferma, i risultati sono stati quindi analizzati dal test t o dall'analisi della varianza unidirezionale seguita dal test di Tukey e sono tutti presentati come media ± DS A p <0,05 era richiesta per la significatività statistica.Tutte le analisi statistiche sono state eseguite con SPSS 25.0 (SPSS Inc., Chicago, IL).Il nostro obiettivo finale era quello di sviluppare una nanoparticella completamente naturale con proprietà anticancro intrinseche.RSV è solubile in solvente inorganico ma insolubile in acqua o tampone, il che ne ostacola l'usabilità nella consegna sistemica di RSV.21 Qui, abbiamo sintetizzato Lec(RSV) come piattaforma terapeutica antitumorale sinergica (Figura 1A).Come si vede nella Figura 1B, una semplice miscela di lecitina e RSV non incapsula automaticamente RSV e forma nanoparticelle.Pertanto, abbiamo utilizzato il metodo di nanoprecipitazione, che è stato utilizzato in un lavoro simile nel nostro gruppo e altri in precedenza.19,22 Solo attraverso il metodo di precipitazione descritto sopra, è stata osservata una chiara soluzione di Lec(RSV) (Figura 1B, a destra).Figura 1 Il diagramma schematico e le caratteristiche della sintesi di Lec(RSV).(A) Rappresentazione schematica dell'utilizzo di lecitina e resveratrolo per formare nanoparticelle di Lec(RSV), (B) il metodo di nanoprecipitazione è stato utilizzato per ottenere Lec(RSV solubile).Figura 1 Il diagramma schematico e le caratteristiche della sintesi di Lec(RSV).(A) Rappresentazione schematica dell'utilizzo di lecitina e resveratrolo per formare nanoparticelle di Lec(RSV), (B) il metodo di nanoprecipitazione è stato utilizzato per ottenere Lec(RSV solubile).Per determinare la morfologia e le dimensioni di Lec e Lec(RSV), sono state effettuate analisi TEM e DLS.Come si vede nella Figura 2A, l'analisi TEM ha rivelato che entrambe le NP Lec vuote hanno mostrato una morfologia sferica uniforme, simile alle NP Lec(RSV) nella Figura 2B.Ciò indicava che l'incapsulamento di RSV non altera le proprietà fisiche di Lec NPs.Tuttavia, sebbene entrambi i gruppi abbiano mostrato una morfologia fisica simile in TEM, l'analisi DLS ha rivelato che la dimensione idrodinamica di Lec(RSV) era maggiore delle NP Lec vuote (151,0 ± 22,93 nm vs 128,4 ± 19,88 nm) (Figura 2C, Tabella 1).Questa osservazione indicava che l'incapsulamento di RSV ha avuto successo23 poiché prevedeva un aumento significativo della dimensione media del Lec(RSV) rispetto al controllo Lec vuoto.Nella nostra ricerca, le nanoparticelle Lec(RSV) possedevano una dimensione media di 151 nm, che era approssimativamente la dimensione ideale per possedere una notevole capacità di carico, stabilità e penetrazione del tumore favorevole.La dimensione ideale può essere accertata in relazione al sito della malattia, agli obiettivi terapeutici e ad altre caratteristiche delle nanoparticelle.La dimensione delle nanoparticelle deve essere maggiore di 10 nm per eludere l'ostacolo della filtrazione renale.24 Un diametro maggiore di 200 nm attiverà il sistema del complemento e sarà rapidamente eliminato dal flusso sanguigno, con aggregazione nella milza e nel fegato.25,26Tabella 1 La dimensione media delle nanoparticelleFigura 2 La dimensione della nanoparticella Lec vuota e della nanoparticella Lec(RSV).(A) Analisi TEM di nanoparticelle Lec vuote.(B) analisi TEM di nanoparticelle Lec(RSV);La barra della scala arancione indicava 200 nm;mentre la barra della scala indicava 100 nm.(C) Il grafico della dimensione idrodinamica media delle nanoparticelle di Lec(RSV);(D) la trama del potenziale zeta delle nanoparticelle di Lec(RSV).Tabella 1 La dimensione media delle nanoparticelleFigura 2 La dimensione della nanoparticella Lec vuota e della nanoparticella Lec(RSV).(A) Analisi TEM di nanoparticelle Lec vuote.(B) analisi TEM di nanoparticelle Lec(RSV);La barra della scala arancione indicava 200 nm;mentre la barra della scala indicava 100 nm.(C) Il grafico della dimensione idrodinamica media delle nanoparticelle di Lec(RSV);(D) la trama del potenziale zeta delle nanoparticelle di Lec(RSV).Il potenziale Zeta delle NP Lec(RSV) indicava anche una carica neutra (Figura 2D).Le particelle cariche neutre e negative sono favorite nella traduzione clinica delle NP in quanto riducono l'assorbimento non specifico delle NP rispetto alle NP cariche positive, che potrebbero essere facilmente assorbite dalle cellule a causa delle interazioni di carica positiva-negativa, che a loro volta portano a una circolazione più lunga durata della vita e un minore accumulo negli organi principali.27 Inoltre, è stato dimostrato che le nanoparticelle con cariche superficiali neutre e negative riducono l'adsorbimento delle proteine ​​sieriche, determinando un'emivita di circolazione più lunga.28Per il rilevamento dell'efficacia dell'incapsulamento in vitro, abbiamo sostituito l'RSV con una molecola autofluorescente cumarina-6, con un peso molecolare simile per determinare l'intensità della fluorescenza all'interno delle nanoparticelle di Lec.L'efficacia di incapsulamento della cumarina-6 è stata calcolata intorno all'85,15% (Tabella 2).Un tasso di incapsulamento dell'85% è un'efficienza generalmente accettata e potrebbe essere considerata alta.29Tabella 2 L'efficacia dell'incapsulamento di RSVTabella 2 L'efficacia dell'incapsulamento di RSVLa stabilità delle nanoparticelle è fondamentale perché la consegna sistemica di nanoparticelle richiede una circolazione prolungata di Lec(RSV) in vivo.Sia le nanoparticelle Lec che Lec(RSV) hanno mostrato stabilità durante un periodo di 48 ore (Figura 3A).Per determinare la stabilità di Lec(RSV), abbiamo misurato la dimensione di Lec(RSV) in punti temporali predeterminati (Day-1, 4, 8, 15, 30 e 60).Come si vede nella Figura 3B, la misurazione DLS di Lec(RSV) ha rivelato modifiche minime durante il periodo di 60 giorni (~ 100-120 nm in tutto), indicando una buona stabilità di Lec(RSV).È interessante notare che la conservazione a lungo termine di Lec(RSV) a 4°C indicava anche l'eccellente stabilità di questa nanopiattaforma (Figura 3C) dall'assenza di aggregati anche dopo 12 mesi di conservazione.Inoltre, RSV è stato rilasciato lentamente dopo l'incapsulamento di Lec, rivelando solo il rilascio cumulativo del 55% circa dopo 720 minuti (Figura 3D).Figura 3 La stabilità delle nanoparticelle Lec e Lec(RSV).(A) La dimensione delle nanoparticelle Lec e Lec(RSV) durante un periodo di 48 ore;(B) la dimensione delle nanoparticelle Lec(RSV) in punti temporali predeterminati (giorno-1, 4, 8, 15, 30 e 60);(C) la comparsa di Lec(RSV) dopo una conservazione a lungo termine di 12 mesi;(D) il rilascio di RSV di nanoparticelle Lec(RSV) dopo l'incapsulamento.Figura 3 La stabilità delle nanoparticelle Lec e Lec(RSV).(A) La dimensione delle nanoparticelle Lec e Lec(RSV) durante un periodo di 48 ore;(B) la dimensione delle nanoparticelle Lec(RSV) in punti temporali predeterminati (giorno-1, 4, 8, 15, 30 e 60);(C) la comparsa di Lec(RSV) dopo una conservazione a lungo termine di 12 mesi;(D) il rilascio di RSV di nanoparticelle Lec(RSV) dopo l'incapsulamento.Abbiamo quindi confermato la capacità di assorbimento in vitro di Lec(RSV).Per visualizzare questo, abbiamo incapsulato FITC sia in Lec che in Lec(RSV) e abbiamo trattato queste nanoparticelle rispettivamente con cellule di cancro al seno BT474.Dopo 4 ore di co-incubazione, sia Lec che Lec(RSV) hanno mostrato un assorbimento significativo nel citoplasma cellulare (Figura 4A e B).Successivamente, abbiamo effettuato un test di citotossicità in vitro per osservare la capacità di uccidere le cellule tumorali dell'RSV.Come si vede nella Figura 4C, il trattamento con RSV ha indicato un'elevata tossicità per le cellule (IC50 ~ 18 µM).Come antiossidante, Lec possiede anche una capacità intrinseca di uccidere il cancro, sebbene non così significativa come l'RSV (IC50 > 40 µM).È interessante notare che Lec(RSV) ha mostrato effetti significativi e sinergici sulla capacità di uccidere le cellule tumorali rispetto al solo trattamento Lec o RSV (IC50 ~ 11 µM).Un fenomeno simile può essere osservato nel test di scavenging ROS, in cui RSV ha mostrato un effetto di scavenging ROS significativo rispetto al controllo o Lec (p <0, 001) e l'incapsulamento di RSV non ha interferito con l'attività biologica di RSV (Figura 4D).Figura 4 La capacità di assorbimento in vitro e la citotossicità delle nanoparticelle di Lec e Lec(RSV).(A e B) L'assorbimento di cellule di cancro al seno BT474 di FITC incapsulato Lec e Lec(RSV);(C) saggio di citotossicità in vitro per osservare la capacità di uccidere le cellule tumorali di Lec, RSV e Lec(RSV), rispettivamente;(D) Effetti di scavenging ROS di Lec, RSV e Lec(RSV).***Valore di significatività indicato di p < 0,001;rispetto al controllo.Figura 4 La capacità di assorbimento in vitro e la citotossicità delle nanoparticelle di Lec e Lec(RSV).(A e B) L'assorbimento di cellule di cancro al seno BT474 di FITC incapsulato Lec e Lec(RSV);(C) saggio di citotossicità in vitro per osservare la capacità di uccidere le cellule tumorali di Lec, RSV e Lec(RSV), rispettivamente;(D) Effetti di scavenging ROS di Lec, RSV e Lec(RSV).***Valore di significatività indicato di p < 0,001;rispetto al controllo.Infine, abbiamo condotto l'esperimento di assorbimento tumorale in vivo nel modello ortotopico BT474.Abbiamo trattato un gruppo di topi nudi Balb/C femmine (n = 3) con NP Lec(RSV + FITC) per 1 ora e un altro gruppo (n = 3) per 4 ore.Come si vede nella Figura 5, l'accumulo di Lec(RSV) è aumentato significativamente dopo 4 ore rispetto al gruppo di 1 ora, indicando l'affidabilità di Lec(RSV) da utilizzare come sistema di somministrazione di farmaci per il trattamento del cancro.L'analisi del test TUNEL ha rivelato un aumento del livello di apoptosi nel gruppo di trattamento di 4 ore rispetto al gruppo di 1 ora, indicando il successo dell'assorbimento di RSV nelle cellule tumorali, esercitando il suo effetto di uccisione delle cellule tumorali in vivo.Figura 5 L'assorbimento tumorale in vivo della nanoparticella di Lec(RSV).(A) Il modello ortotopico BT474 è stato utilizzato per eseguire esperimenti di assorbimento tumorale in vivo.Abbiamo trattato un gruppo di topi nudi Balb/C femmine (n = 3) con NP Lec(RSV + FITC) per 1 ora e un altro gruppo (n = 3) per 4 ore.I cerchi rossi indicano gli effetti di accumulo delle nanoparticelle nel tumore a 1 ora e 4 ore dopo l'iniezione.Mostra che l'assorbimento tumorale di Lec(RSV) è stato significativamente aumentato nel tumore dopo 4 ore rispetto al gruppo di 1 ora, indicando l'affidabilità di Lec(RSV) da utilizzare come sistema di somministrazione di farmaci per il trattamento del cancro.(B) Analisi del saggio TUNEL della sezione del tumore in (A).A 4 ore, i tumori trattati con Lec(RSV) indicavano un livello di apoptosi più elevato rispetto ai tumori trattati solo per 1 ora, indicando un effetto prolungato dell'effetto di uccisione del tumore di Lec(RSV).Barra della scala indicata 50 µm.Figura 5 L'assorbimento tumorale in vivo della nanoparticella di Lec(RSV).(A) Il modello ortotopico BT474 è stato utilizzato per eseguire esperimenti di assorbimento tumorale in vivo.Abbiamo trattato un gruppo di topi nudi Balb/C femmine (n = 3) con NP Lec(RSV + FITC) per 1 ora e un altro gruppo (n = 3) per 4 ore.I cerchi rossi indicano gli effetti di accumulo delle nanoparticelle nel tumore a 1 ora e 4 ore dopo l'iniezione.Mostra che l'assorbimento tumorale di Lec(RSV) è stato significativamente aumentato nel tumore dopo 4 ore rispetto al gruppo di 1 ora, indicando l'affidabilità di Lec(RSV) da utilizzare come sistema di somministrazione di farmaci per il trattamento del cancro.(B) Analisi del saggio TUNEL della sezione del tumore in (A).A 4 ore, i tumori trattati con Lec(RSV) indicavano un livello di apoptosi più elevato rispetto ai tumori trattati solo per 1 ora, indicando un effetto prolungato dell'effetto di uccisione del tumore di Lec(RSV).Barra della scala indicata 50 µm.Qui, abbiamo sviluppato un sistema di nanoparticelle Lec(RSV) completamente naturale.Lec(RSV) ha mostrato stabilità di lunga durata, elevato assorbimento cellulare nelle cellule di cancro al seno BT474 e ritenzione significativa nel modello ortotopico delle cellule di cancro al seno BT474 con tossicità minima.Nel complesso, Lec(RSV) potrebbe essere potenzialmente utilizzato come chemioterapico alternativo e potrebbe essere facilmente tradotto in applicazione clinica come terapia antitumorale.Questo lavoro è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China (82050410363, 82072930), dal programma Hundred Talents for Young Scholars of Sun Yat-sen University (1320318003), progetto 111 (n. B20062), Guangzhou Science and Technology Bureau (201704020131) ), il Premio per i giovani eccezionali della provincia del Guangdong (2021B1515020066) e il progetto Tre milioni per tre anni di SYSMH (132090023).Gli autori non segnalano conflitti di interesse in questo lavoro.1. Gilman A. La sperimentazione clinica iniziale della senape azotata.Sono J Surg.1963;105:574–578.doi:10.1016/0002-9610(63)90232-02. Qin SY, Zhang AQ, Cheng SX, et al.Sistemi di autosomministrazione dei farmaci per la terapia del cancro.Biomateriali.2017;112:234–247.doi:10.1016/j.biomaterials.2016.10.0163. Aung TN, Qu Z, Kortschak R, et al.Comprendere l'efficacia delle miscele di composti naturali nel cancro attraverso la loro modalità d'azione molecolare.Int J Mol Sci.2017;18(3):656.doi:10.3390/ijms180306564. Li X, Liang S, Tan CH, et al.Nanocarrier nel potenziamento dell'efficacia terapeutica dei farmaci naturali.Integrazione BIO.2021;2:40–49.doi:10.15212/bioi-2020-00405. 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